Gen oporności na karbapenemy (KPC/NDM/OXA 48/OXA 23/VIM/IMP)
Nazwa produktu
Zestaw do wykrywania genu oporności na karbapenemy (KPC/NDM/OXA 48/OXA 23/VIM/IMP) HWTS-OT045 (fluorescencyjna reakcja PCR)
Epidemiologia
Karbapenemy to atypowe antybiotyki β-laktamowe o najszerszym spektrum działania przeciwbakteryjnego i najsilniejszej aktywności przeciwbakteryjnej. Ze względu na stabilność wobec β-laktamazy i niską toksyczność, stały się jednym z najważniejszych leków przeciwbakteryjnych w leczeniu ciężkich zakażeń bakteryjnych. Karbapenemy charakteryzują się wysoką stabilnością wobec β-laktamaz o rozszerzonym spektrum plazmidowym (ESBL), chromosomów i cefalosporynaz plazmidowych (enzymów AmpC).
Kanał
| Mieszanina PCR 1 | Mieszanina PCR 2 | |
| FAM | CHOCHLIK | KRZEPA |
| VIC/HEX | Kontrola wewnętrzna | Kontrola wewnętrzna |
| CY5 | NDM | KPC |
| ROX | OXA48
| OXA23 |
Parametry techniczne
| Składowanie | ≤-18℃ |
| Okres przydatności do spożycia | 12 miesięcy |
| Typ okazu | Plwocina, czyste kolonie, wymaz z odbytu |
| Ct | ≤36 |
| CV | ≤5,0% |
| LoD | 103CFU/ml |
| Specyficzność | a) Zestaw wykrywa standaryzowane negatywne odniesienia firmowe, a wyniki spełniają wymagania odpowiednich odniesień. b) Wyniki testu reaktywności krzyżowej wykazały, że zestaw nie reaguje krzyżowo z innymi patogenami układu oddechowego, takimi jak: Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, Staphylococcus aureus, Klebsiella oxytoca, Haemophilus influenzae, Acinetobacter junii, Acinetobacter haemolyticus, Legionella pneumophila, Escherichia coli, Pseudomonas fluorescens, Candida albicans, Chlamydia pneumoniae, adenowirus oddechowy, Enterococcus lub próbkami zawierającymi inne geny oporności na leki: CTX, mecA, SME, SHV, TEM itp. c) Substancje przeciwzakłóceniowe: Do testu interferencyjnego wybrano mucynę, minocyklinę, gentamycynę, klindamycynę, imipenem, cefoperazon, meropenem, chlorowodorek cyprofloksacyny, lewofloksacynę, kwas klawulanowy i roksytromycynę. Wyniki wykazały, że wymienione powyżej substancje interferujące nie mają wpływu na wykrywanie genów oporności na karbapenemy KPC, NDM, OXA48, OXA23, VIM i IMP. |
| Obowiązujące instrumenty | Systemy PCR w czasie rzeczywistym Applied Biosystems 7500 Systemy PCR w czasie rzeczywistym QuantStudio®5 Systemy PCR w czasie rzeczywistym SLAN-96P (Hongshi Medical Technology Co., Ltd.) System PCR w czasie rzeczywistym LightCycler®480 System detekcji PCR w czasie rzeczywistym LineGene 9600 Plus (FQD-96A,HangzhouTechnologia bioelektryczna) MA-6000 Ilościowy cykler termiczny w czasie rzeczywistym (Suzhou Molarray Co., Ltd.) System PCR w czasie rzeczywistym BioRad CFX96 System PCR w czasie rzeczywistym BioRad CFX Opus 96 |
Przepływ pracy
Opcja 1.
Zalecany odczynnik ekstrakcyjny: Zestaw do analizy ogólnego DNA/RNA Macro & Micro-Test (HWTS-301)9-50, HWTS-3019-32, HWTS-3019-48, HWTS-3019-96) (który można stosować z automatycznym ekstraktorem kwasów nukleinowych Macro & Micro-Test (HWTS-3006C, HWTS-3006B)) firmy Jiangsu Macro & Micro-Test Med-Tech Co., Ltd. Dodać 200 μl soli fizjologicznej do osadu plechy. Kolejne kroki należy wykonać zgodnie z instrukcjami ekstrakcji, a zalecana objętość elucji wynosi100μL.
Opcja 2.
Zalecany odczynnik ekstrakcyjny: Odczynnik do ekstrakcji lub oczyszczania kwasów nukleinowych (YDP302) firmy Tiangen Biotech (Pekin) Co., Ltd. Ekstrakcję należy rozpocząć ściśle według kroku 2 instrukcji użycia (dodać 200 μl buforu GA do osadu plechy i wstrząsać, aż plecha całkowicie się zawiesi). Do elucji należy użyć wody wolnej od rybonukleaz i deoksyrybonukleaz (RNase/DNase), a zalecana objętość elucji wynosi 100 μl.
Opcja 3.
Zalecany odczynnik ekstrakcyjny: Odczynnik do uwalniania próbek makro i mikrotestowych. Próbkę plwociny należy przepłukać, dodając 1 ml soli fizjologicznej do wyżej wymienionego precypitatu plechy, wirować z prędkością 13000 obr./min przez 5 minut, a następnie odrzucić supernatant (zachować 10–20 µl supernatantu). W przypadku czystej kolonii i wymazu z odbytu, dodać 50 µl odczynnika do uwalniania próbek bezpośrednio do wyżej wymienionego precypitatu plechy, a kolejne kroki ekstrakcji należy wykonać zgodnie z instrukcją użycia.
